Klenow-Enzym

Klenow-Enzym

Als Klenow-Fragment bzw. Klenow-Enzym wird die größere der beiden Untereinheiten der DNA-Polymerase I von Escherichia coli bezeichnet. Es wurde nach seinem Entdecker, dem dänischen Biochemiker Hans Klenow benannt.

Eigenschaften

Es verfügt über zwei unterschiedliche enzymatische Funktionen.

  • eine 5'-3'-Polymerase-Funktion, also den Einbau von Nukleotiden in einen neuen DNA-Strang, wobei einzelstränge DNA als Template vorliegt
  • eine 3'-5'-Exonuclease-Aktivität.

Verwendung

Das Klenow-Fragment wird in der Biochemie und Molekularbiologie bei Klonierungsexperimenten für verschiedene Zwecke verwendet:

  • Synthese von doppelsträngiger DNA (Polymerasefunktion)

Diese Aktivität wird für die Herstellung markierter DNA durch Nick translation oder Random priming für weitere Versuche, z. B. Southern-Blots (Polymerasefunktion) genutzt.

  • Auffüllen von 5'-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Polymerasefunktion)
  • Abbau von 3'-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Exonukleasefunktion)

Diese Aktivitäten dienen zur Herstellung von sogenannten blunt ends, die mittels T4-Ligase verbunden werden können.


Wikimedia Foundation.

Игры ⚽ Поможем сделать НИР

Schlagen Sie auch in anderen Wörterbüchern nach:

  • Klenow-Fragment — Als Klenow Fragment, auch Klenow Enzym, wird das größere der beiden Proteinfragmente der DNA Polymerase I aus Escherichia coli bezeichnet, die nach enzymatischer Spaltung mit Subtilisin entstehen. Es besitzt noch die 5 →3 Polymerase Aktivität und …   Deutsch Wikipedia

  • Klenow-Polymerase — Als Klenow Fragment bzw. Klenow Enzym wird die größere der beiden Untereinheiten der DNA Polymerase I von Escherichia coli bezeichnet. Es wurde nach seinem Entdecker, dem dänischen Biochemiker Hans Klenow benannt. Eigenschaften Es verfügt über… …   Deutsch Wikipedia

  • Southern-Blot — Autoradiogramm eines Southern Blots Beim Southern Blot handelt es sich um eine 1975 von Edwin Southern entwickelte molekularbiologische Untersuchungsmethode für DNA.[1] Sie ermöglicht den Nachweis einer Gensequenz in einem komplexen DNA–Gemisch… …   Deutsch Wikipedia

  • Random priming — Als Random priming (oder auch random primed oligo labeling) wird in der Molekularbiologie eine Technik zur Markierung von DNA bezeichnet. Dabei synthetisiert man an denaturierte (einzelsträngige) DNA mit Hilfe von kurzen Primern als Startpunkt… …   Deutsch Wikipedia

  • Southern Blot — Autoradiogramm eines Southern Blots Beim Southern Blot handelt es sich um eine 1975 von Edwin Southern entwickelte molekularbiologische Untersuchungsmethode für die DNA.[1] Sie ermöglicht den Nachweis einer Gensequenz in einem komplexen DNA… …   Deutsch Wikipedia

Share the article and excerpts

Direct link
Do a right-click on the link above
and select “Copy Link”