Interne-Totalreflektions-Fluoreszenz-Mikroskopie

Interne-Totalreflektions-Fluoreszenz-Mikroskopie (engl. Total internal reflection fluorescence microscopy, TIRFM) ist eine spezielle Methode der Mikroskopie, bei der die Fluoreszenzanregung eine Probe über ein evaneszentes (abklingendes) elektrisches Feld engeregt wird. Zur Erzeugung des evaneszenten Feldes wird Licht an der Grenzfläche des probenträgers zur Probe totalreflektiert.

Aufbau und Anwendung

Funktionsschema

Die TIRF-Mikroskopie kann zur Untersuchung von Strukturen genutzt werden, die sich sehr nahe (ca. 200 nm für sichtbares Licht) an Oberflächen befinden. Man verwendet einen Lichtstrahl, der im Objektträger totalreflektiert wird – lediglich eine evaneszente Welle dringt mit exponentiell abfallender Amplitude ins Medium ein und regt in diesem sehr schmalen Bereich die Fluoreszenz an. Mit dieser Methode werden normalerweise Zellmembranen und der Bereich direkt unter der Zellmembran untersucht. Bei klassischer Fluoreszenzmikroskopie würde das oberflächennahe Signal vom Hintergrundstreulicht überdeckt. TIRF eignet sich besonders zur Untersuchung von Exocytose.

Literatur

• N. L. Thompson, T. P. Burghardt, D. Axelrod: Measuring surface dynamics of biomolecules by total internal reflection fluorescence with photobleaching recovery or correlation spectroscopy. In: Biophys J.. 33, Nr. 3, 1981, S. 435–454 (doi:10.1016/S0006-3495(81)84905-3) (PDF).