Klenow-Enzym

Klenow-Enzym

Als Klenow-Fragment bzw. Klenow-Enzym wird die größere der beiden Untereinheiten der DNA-Polymerase I von Escherichia coli bezeichnet. Es wurde nach seinem Entdecker, dem dänischen Biochemiker Hans Klenow benannt.

Eigenschaften

Es verfügt über zwei unterschiedliche enzymatische Funktionen.

  • eine 5'-3'-Polymerase-Funktion, also den Einbau von Nukleotiden in einen neuen DNA-Strang, wobei einzelstränge DNA als Template vorliegt
  • eine 3'-5'-Exonuclease-Aktivität.

Verwendung

Das Klenow-Fragment wird in der Biochemie und Molekularbiologie bei Klonierungsexperimenten für verschiedene Zwecke verwendet:

  • Synthese von doppelsträngiger DNA (Polymerasefunktion)

Diese Aktivität wird für die Herstellung markierter DNA durch Nick translation oder Random priming für weitere Versuche, z. B. Southern-Blots (Polymerasefunktion) genutzt.

  • Auffüllen von 5'-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Polymerasefunktion)
  • Abbau von 3'-überstehenden, einzelsträngigen DNA-Sequenzen nach Restriktionen (Exonukleasefunktion)

Diese Aktivitäten dienen zur Herstellung von sogenannten blunt ends, die mittels T4-Ligase verbunden werden können.


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